| dc.description.abstract | Trichophyton rubrum é o agente causador mais frequente de dermatomicoses superficiais no Brasil e no mundo. Apesar da importância clínica das infecções provocadas por T. rubrum, os processos moleculares da relação fungo-hospedeiro não foram totalmente compreendidos. A técnica de microarranjo pode possibilitar a identificação de genes diferencialmente expressos por T.rubrum durante seu crescimento sobre proteínas da matriz extracelular da pele como queratina e elastina, identificando genes envolvidos com a dermatofitose superficial e profunda, respectivamente. O conhecimento sobre fatores de virulência do fungo na infecção do hospedeiro podem ser utilizados como alvos para o desenvolvimento de novos antifúngicos. As chalconas são flavonoides que apresentam atividade antifúngica contra dermatófitos, acredita-se que seja através da ação em diferentes alvos como a parede celular e na membrana celular (síntese do ergosterol e de ácido graxo). Dessa forma, o objetivo do trabalho foi avaliar o perfil transcricional de T. rubrum exposto à trans-chalcona utilizando substratos proteicos (queratina e elastina) e, a partir dos dados de transcriptoma, estudar a função de um gene relacionado com a resposta à trans-chalcona através da obtenção de uma linhagem de mutante nulo pela técnica de rompimento gênico. Para tanto, T. rubrum foi cultivado em meio mínimo contendo queratina ou elastina adicionado de trans-chalcona por 3, 7 e 14 dias, sendo empregadas lâminas de microarranjo customizadas no formato 4x44K, cobrindo 6091 genes. Foram modulados 290 e 62 genes durante o crescimento de T. rubrum em queratina e elastina, respectivamente. Durante o crescimento de T. rubrum em queratina um número significativo de proteases (15) foram induzidas, com destaque para Mep 4 e Lap 1, em contraste, em elastina houve a indução de apenas 2 proteases concomitantemente com a indução de 2 lipases. Indução exclusiva das chaperonas HSP70-like, HSP88-like e HSP90-like foi observada para queratina. Esses dados podem ser indicativos do perfil transcricional da infecção superficial e profunda. Paralelamente, a exposição de T. rubrum à trans-chalcona gerou 100, 148 e 145 genes diferencialmente expressos em meio mínimo, meio mínimo contendo queratina e meio mínimo contendo elastina, respectivamente. As principais classes de genes modulados por esse composto mostraram relação com síntese de lipídios (ácidos graxos), vias alternativas de geração de energia como ciclo do glioxilato e β oxidação de ácidos graxos, e vias de transdução de sinais envolvidas com a integridade de parede celular (CWI). De fato, ensaio de western blot mostrou que trans-chalcona aumentou a fosforilação da proteina MAPK em T.rubrum, sugerindo que esse composto ativa a cascata de sinalização envolvida no mecanismo de reparo e reconstituição de parede celular. No sentido de estudar os alvos da transchalcona, foi obtida uma linhagem nula para o gene da ácido graxo acetil transferase (FAC). O transformante denominado Δ FAC(18) apresentou maior crescimento em meio mínimo suplementado com ácidos graxos, mostrou-se mais resistente à trans-chalcona, além de apresentar menor crescimento em experimento de infecção utilizando fragmentos de unhas. Portanto, sugere-se que a trans-chalcona exerça atividade antifúngica contra T.rubrum atuando sobre a sintese de ácido graxo e provocando alterações no metabolismo energético do fungo e, em decorrência, interfirindo com a integridade de parede celular. | pt_BR |
